色综合天天综合网国产成人网,黑料门独家爆料吃瓜在线,浮妇高潮喷白浆视频,国产日韩欧美一区二区东京热

網(wǎng)站首頁  ◇  技術(shù)支持  ◇  實(shí)驗(yàn)常見問題分析與解決方案
實(shí)驗(yàn)常見問題分析與解決方案
  • 發(fā)布日期:2024-10-22     信息來源:      瀏覽次數(shù):882
    • 上海金鵬分析儀器有限公司針對WB做不好的常見問題分析與解決方案:
      問題可能原因驗(yàn)證或解決辦法





      背景較高
      封閉不充分延長封閉時(shí)間,更換合適的封閉劑(脫脂奶粉,BSA,血清等)
      一抗?jié)舛冗^高增加一抗稀釋倍數(shù),
      抗體孵育溫度過偏高建議4℃孵育
      二抗非特異性結(jié)合
      或與封閉劑交叉反應(yīng)
      設(shè)置二抗對照(不加一抗),降低二抗?jié)舛?/td>
      一抗或二抗與封閉劑有交叉反應(yīng)在孵育和洗滌液中加入Tween-20以減少交叉反應(yīng).
      洗膜不充分增加洗滌次數(shù)
      膜不合適NC膜比PVDF膜背景低
      膜干燥保證充分的反應(yīng)液,避免出現(xiàn)干膜現(xiàn)象











      沒有陽性條帶 或很弱

      一抗、二抗等不匹配
      訂購試劑時(shí)認(rèn)真選取一抗與組織種屬, 一抗與二抗或/和底物與酶 系統(tǒng)之間相匹配的抗體及底物??赏ㄟ^設(shè)置內(nèi)參可以驗(yàn)證二級檢測 系統(tǒng)的有效性。
      -抗或/和二抗?jié)舛鹊?/td>增加抗體濃度,延長孵育時(shí)間
      封閉劑與一抗或二抗有交叉反應(yīng)封閉時(shí)使用溫和的去污劑,如TWEEN20,或更換封閉劑(常用的 脫脂奶、BSA、血清或明膠
      一抗不識別目的物種的靶蛋白檢查說明書,或做ClustalW比對,設(shè)陽性對照
      樣本中無靶蛋白或靶蛋白含量過 低(抗原無效)設(shè)置陽性對照,如果陽性對照有結(jié)果,但標(biāo)本沒有則可能是標(biāo)本中 不含靶蛋白或靶蛋白含量太低。后者可增加標(biāo)本上樣量至少每孔   20-30ug蛋白,樣本制備時(shí)使用蛋白酶抑制劑,或分級提取目的蛋白。
      轉(zhuǎn)膜不充分,或洗膜過度使用麗春紅S檢測轉(zhuǎn)膜效果,PVDF膜需浸透,需正確的轉(zhuǎn)膜操作,勿 過度洗膜
      過度封閉使用含0.5%脫脂奶或無脫脂奶的抗體稀釋液,或更換封閉劑,減少 封閉時(shí)間
      一抗失效使用有效期內(nèi)抗體,分裝保存,避免反復(fù)凍融取用,工作液現(xiàn)配現(xiàn)用
      二抗受疊氮鈉抑制所用溶液和容器中避免含有疊氮鈉(HRP的抑制劑)
      酶和底物失效直接將酶和底物進(jìn)行混合,如果不顯色則說明酶失活了、選擇在有 效期內(nèi)、有活性的酶聯(lián)物,使用新鮮的底物.
      曝光時(shí)間過短延長曝光時(shí)間






      多非特異性條 帶
      或條帶位置不 對
      細(xì)胞傳代次數(shù)過多,使其蛋白表 達(dá)模式的分化使用原始或傳代少的細(xì)胞株,或平行實(shí)驗(yàn)
      體內(nèi)表達(dá)的蛋白樣本具有多種修 飾形式:乙?;?、磷酸化、甲基 化、烷基化、糖基化等
      查文獻(xiàn),使用去修飾的試劑使蛋白恢復(fù)其正確的大小
      蛋白樣本降解使用新鮮制備的標(biāo)本,并使用蛋白酶抑制劑
      新蛋白或同族蛋白的分享同種表 位的不同剪接方式查其它文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo),或BLAST搜尋,使用說明書報(bào)導(dǎo)的細(xì)胞株或組織
      一抗?jié)舛冗^高降低抗體濃度,可以減少非特異性條帶
      二抗?jié)舛冗^高產(chǎn)生非特異性結(jié)合降低抗體濃度,增加二抗對照
      選擇特異性更強(qiáng),只針對重鏈的二抗
      抗體未純化使用單克隆或親和純化的抗體,減少非特異條帶
      蛋白存在二聚體或多聚體SDS-PAGE電泳上樣前,煮沸10 min,




      以增強(qiáng)蛋白質(zhì)解聚變性
      背景有白色/黑 色斑點(diǎn)轉(zhuǎn)膜時(shí)有氣泡或抗體分布不均盡量去除氣泡,抗體孵育時(shí)保持搖動
      抗體與封閉劑結(jié)合過濾封閉劑
      暗片現(xiàn)白條帶一抗或二抗加入過多稀釋抗體的濃度
      目的條帶過低/ 過高SDS-PAGE膠濃度選擇不合適調(diào)整膠濃度,分子量大的蛋白用低濃度膠,分子量小的蛋白用高濃 度膠
      “微笑"條帶遷移過快,電泳溫度過高降低電泳速度,低溫電泳(冷室)




      轉(zhuǎn)膜不充分
      膜沒有完quan均勻濕透使用100%methanol漫透膜
      靶蛋白分子量小于10,000選擇小孔徑的膜,縮短轉(zhuǎn)移時(shí)間
      靶蛋白等電點(diǎn)等于或接近轉(zhuǎn)移緩 沖液pH值|可嘗試使用其他緩沖液如CAPS緩沖液(pH10.5)或使用低pH值緩 沖液如乙酸緩沖液

      甲醇濃度過高
      過高甲醇濃度會導(dǎo)致蛋白質(zhì)與SDS分離,從而沉淀在凝膠中,同
      時(shí)會使凝膠收縮或變硬,從而抑制高分子量蛋白的轉(zhuǎn)移。降低甲醇 濃度或者使用乙醇或異丙醇代替
      轉(zhuǎn)移時(shí)間不夠Thick gel對于厚的膠以及高分子量蛋白需要延長轉(zhuǎn)移時(shí)間



    色综合天天综合网国产成人网,黑料门独家爆料吃瓜在线,浮妇高潮喷白浆视频,国产日韩欧美一区二区东京热

                丰满熟女人妻大乳| 中文字幕人成乱码熟女香港| 午夜性刺激小说| 麻豆高清免费国产一区| 在线观看的av网站| 老师扒开粉嫩小泬让我添| 亚洲最大的成人网| 欧美 日韩 国产 成人 在线观看 | 国产伦精品一区二区三区免.费| 亚洲WW国产A大作| 久久久久国产精品| 亚洲嫩模喷白浆在线观看| 熟睡人妻被讨厌的公侵犯| 拍真实国产伦偷精品| 亚洲精品一区二区三区四区高清 | 被男人吃奶跟添下面特舒服 | 上吃奶下面日| 韩日美无码精品无码| 摸丰满大乳奶水WWW免费| 成人乱人乱一区二区三区| 大屁股熟女一区二区三区| 日韩人妻无码免费视频一区二区三区 | 精品久久久久久无码人妻| 亚洲清清爽爽AABB| 四虎MV最新地域网名怎么取| 久久久久亚洲AV成人网人人软件| 日韩精品一区二区三区在线观看| 92久久精品一区二区| 国产精品久久久久精品综合紧| 精品一区二区三区免费播放| 丁香花高清在线观看完整版| 久久久久国色AV免费观看性色| 免费人成激情视频在线观看| 无码人妻久久一区二区三区免费 | 久久国产一区二区三区| 亚洲AV无码国产精品永久一区| 男妓被多攻玩到哭男男| AV下页| 亚洲午夜AV久久久精品影院色戒| 人妻熟妇乱又伦精品视频| 美女露出奶头扒开尿口|